细胞实验—多溶剂J合|MCE浙江省代理杭州昊鑫生物

不到不得已,谁也不想现用现配

细胞实验的工作浓度通常在 μM 级别,有的还是 nM 和 pM,要做到现用现配,难度系数有点高,好比让一个日均不到 1000 步的人去爬 5000 米的山峰,这难度,你细品!一方面这个操作对天平的精度要求很高,误差太大,再者,每一次称量都会有损失,称量的过程也难以做到无菌操作,当然,对于一些极不稳定的化合物,比如有极易氧化的特性的化合物,现用现配是刚需。

不提比例就判定有毒,实在是不负责任的耍流氓行为

以 DMSO 为例,一般建议其终浓度在 0.1% 以下,这个浓度是非常保守的建议了,有一些细胞本身并不敏感,可以承受 0.5% 的 DMSO,甚至 1% 的 DMSO 对细胞活力也没有明显影响。不过呢,不管什么比例,记得要做好对照哦!

凡事都有例外,没有wan能,只有合适

正如前面所提到的,DMSO 固然可用于诸多化合物的溶解,但是面对含铂化合物的时候,也是无能为力呢,这个时候,就需要 DMF 等辅助出场了。再比如辛伐他汀 (Simvastatin),需要溶于乙醇、再用 NaOH 激huo,才可进行实验。

溶解药物,既要讲“法理”,也要通“人情”

比如,GW4869 微溶于 DMSO,难溶于水,除了借力甲磺酸,也可用 DMSO 配置成均匀的混悬液作为储备液,z后用培养基稀释可达到澄清状态;比如,天气冷的时候,可先预热 DMSO 母液和培养基,这样稀释后减少析出的可能性;比如配置/稀释的过程中,如遇到析出情况,可借助超声/加热的方式辅助溶清;比如购买了大量粉末,瓶子不够大,无法配置到相应浓度的时候,可分步溶解再转移至大容器处理。

不要随便拒绝没听过的溶剂

四氢呋喃 (THF)、丙tong、乙*、乙酸乙酯,这些溶剂不常见,却是友好的存在,比如丙tong,在 MCF-7、RAW-264.7 以及 HUVEC 细胞系中,比 DMSO、乙醇和 DMF 都更加友好、毒性更小。再比如在 CV1-P 细胞系中,0.5% THF 对细胞活力也没有明显影响。

暴露于不同溶剂的 MCF-7、RAW-264.7 和 HUVEC 细胞的细胞存活率

参考文献

1.Shigeo Nagashima, Hiroaki Okamoto, et al. Hepatitis E virus egress depends on the exosomal pathway, with secretory exosomes derived from multivesicular bodies. J Gen Virol. 2014 Oct;95(Pt 10):2166-2175.

2. S Adler, S. Bremer, et al. The effects of solvents on embryonic stem cell differentiation. Toxicol In Vitro. 2006 Apr;20(3):265-71.

3. Leila Jamalzadeh, Hosein Ghafoori, et al. Cytotoxic Effects of Some Common Organic Solvents on MCF-7, RAW-264.7 and Human Umbilical Vein Endothelial Cells. Avicenna J Med Biochem. 2016 June; 4(1):e33453.

4.Orly Livny, Betty Schwartz, et al. Lycopene inhibits proliferation and enhances gap-junction communication of KB-1 human oral tumor cells. J Nutr. 2002 Dec;132(12):3754-9.

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